ubiquilin 4相互作用蛋白的鉴定

黄声凯；王佳；李燕；李渊；林虹；李东东；崔婵娟；王国婧；赵玫；黄常志

关键词：ubiquilin4, 亚细胞定位, GST-pulldown, 相互作用蛋白, MYH9蛋白

摘要：目的筛选、鉴定与ubiquilin 4相互作用的蛋白,探讨ubiquilin 4在肿瘤发生、发展中的作用机制.方法利用细胞免疫荧光技术,确定外源及内源ubiquilin 4在MKN45细胞中的定位;构建含有UBQLN4和GST标签的原核表达载体pGEX-UBQLN4,将其转化至大肠杆菌中,6 h后收集蛋白.运用标签纯化ubiquilin 4,利用GST-pull down技术寻找差异条带,再进一步应用蛋白质谱技术鉴定蛋白,并通过免疫共沉淀法进行验证.结果免疫荧光显微镜显示,外源及内源ubiquilin 4均主要定位于细胞核和细胞质.通过纯化及蛋白质谱分析技术鉴定发现,MYH9蛋白与ubiquilin 4存在相互作用.结论 MYH9蛋白与ubiquilin 4存在相互作用,可能为阐明ubiquilin 4在肿瘤发生、发展中的作用机制提供重要的依据.